供体细胞注入卵周隙的好处（供体细胞注入助孕的优点）
利用较细显微注射注核针抽吸核供体细胞使核膜破裂，吸入供体核后，直接刺破受体卵质膜，将核直接注入卵周隙，完成细胞核移植。然后逐渐减小固定吸管的负压放开重组胚。直接注射法对卵膜及卵细胞质损伤大，容易造成卵细胞**。
精子采集与体外获能1、精子的选择常采用“上浮分离法”：在**中加入少量培养液，有活力的精子会游到培养液上部。这样收集培养液上面的精子即可得到有活力的精子。
2、精子获能是指精子获得穿透**透明带能力的过程。雄性**中含有“去能因子”，附在精子表面，是顶体酶的抑制剂，抑制了精子的受精能力。
3、去能因子的清除主要依靠宫颈、**及输卵管液中的β淀粉酶，后者在卵泡液中含量也很高。这些酶可以水解糖蛋白等“去能因子”，使精子顶体酶活性恢复，具有受精能力。
4、较初通过在同种或一种雌性生殖道孵育精子获能，后来发展到用**液、卵泡液、**内膜提取液或血清等再体外培养精子获能。
卵细胞回收与成熟培养1、用孕酮、雌二醇、促卵泡激素、黄体生成素、*****、前列腺素和孕马血清促性腺素等促进卵细胞的成熟和排卵。
2、影响超数排卵效果的因素包括：供体年龄、供体品种差异、激素剂量、卵巢状况等。
3、成熟卵细胞的收集
4、雌性动物超排卵后，将腹腔镜插入腹腔，观察到卵泡后用吸管吸出卵细胞。这种方法的关键是掌握卵细胞进入输卵管和卵细胞在输卵管中维持受精能力的时间。这种方法操作程序复杂，成本较高。由于超数排卵采集的卵细胞已在体内发育成熟，不需要成熟培养可直接受精。
5、助孕的收集、选择与成熟培养
6、活体卵巢采集
7、借助超声波探测仪、内窥镜或腹腔镜直接从活体动物的卵巢中吸,母细胞。
8、对于牛和马等大家畜，常采用超声波探测仪辅助,，其方法是用手从直肠把握卵巢，经**壁穿刺插入吸卵针，借助B型超声波图像引导吸,泡中的助孕。
9、这种手术方法简单省时，操作方便，可以反复多次采集。
10、屠宰后家畜卵巢采集
11、从刚屠宰的母畜体内摘出卵巢，洗涤后保存在30-70℃的无菌生理盐水中，快速运到实验室，在无菌条件下用注射器或真空泵抽吸卵泡中的助孕。也可对卵巢进行切片收集助孕。摘出卵巢应在1-4h内收集。从废弃卵巢中采集助孕关键是要注意卵巢的保温和防止微生物污染。
供体细胞注入卵周隙的好处
1、由于**动作比精子入卵的速度快得多，所以**手术要轻缓。
2、管内只要有一极小的气泡，注射器的调节就失灵。
3、先在滤纸上除去胶膜，然后移入皿底涂有一层琼脂的并盛有分离液的培养皿中，用两把镊子剥去胚胎外余下的各层胶膜，切下外胚层，吸去不用的胚胎部分。
4、经过胚胎移植，均可获得一定比例的核移植小鼠。
5、他们在1976年前后首次获得的鲤鲫移核鱼，不仅有理论意义，而且也为鱼类育种开辟了一条新的途径。
6、分散后的胚胎细胞用毛细吸管移到盛有手术液的培养皿中，置于涂有琼脂的小载玻片上，作为移植时的供体细胞。
7、如不分散，可用毛细吸管轻轻吹打。
8、如果注射速度太快，注入卵内的压力过大，则会使**破裂，导致实验失败。
9、这样可使拉出的微吸管内部洁净，不致影响细胞核的吸入和射出。
10、还应调节使供体细胞尽量靠近管口，避免注核时带入较多的手术液。
11、此时可见到**质膜弹性很大，在管口与透明带之间质膜被拉成细丝，然后断开，形成只有细胞质的去核卵和在针管内有两个原核和少量细胞质，外有质膜包裹的两个部分。
供体细胞注入卵周隙的好处
受体卵的准备1、去膜：
2、激动：经人工催产使蛙卵成熟。挤出成熟的蛙卵，逐个去掉卵胶膜，接着把卵整齐地排列在高温灭菌过的培养皿内，使其粘于皿底。并使**动物极朝上，以便进行激动和挑核。
3、挑核：蛙卵在未受精前仍处于第二次成熟分裂的中期。为了使**完成第二次成熟分裂，排出第二极体，在双目解剖镜下，用一枚消毒过的玻璃针在动物极靠近赤道的地区浅刺一下，目的是代替自然受精时精子入卵的过程。
4、再去膜：当第二极体出现时，用一枚消毒过的玻璃针在极体处斜插入**表层，然后迅速提起针尖，由于卵黄膜的破裂，极体下的卵核随着一小部分细胞质流出卵外，形成一个卵外球，一般极体排出15分钟以后会逐渐消失。
5、显微注射器的准备：挑核后经过10分钟左右，待伤口基本愈合时，用两把磨的很尖的钟表镊子，渐次剥去卵外胶膜，直至余下一层受精膜为止。操作步骤如下：在双目解剖镜下，先将一把尖头镊子的一边**从**附着皿底的胶膜处小心而快速地插入到较内层胶膜，然后夹紧胶膜，把卵固定住，再用另一把镊子从**另一侧夹紧胶膜，向上向后把胶膜掀去，若用两把镊子左右对拉，则易损伤**，且使卵质变位，影响胚胎发育。
将供体细胞注入到助孕外的
1、而有一些资料题中提到“细胞衰老是与细胞质有关的，移植整个细胞与只移植核是有区别的”，如何解释？
2、种方法操作简便，对助孕损伤较小，现在较为常用，多莉羊的产生就是用的这种方。
3、这种方法操作简便，对助孕损伤较小，现在较为常用，多莉羊的产生就是用的这种方法。
4、但是核移植后的细胞质中同时存在供体细胞和受体细胞的线粒体，到底这些线粒体是共存，还是一种消失一种保留，这个还处于研究阶段。
5、版选修3p.48“细胞核移植”图示中，为什么是将供体细胞而不是供体细胞的核注人去核助孕？
将吸有供体细胞核的微吸管在离动物极45度左右的地方刺入动物半球的中心，再稍微向上提一下管口，然后轻轻地推动微量注射器，把管内的细胞核连同周围的细胞质慢慢地注入卵内。如果注射速度太快，注入卵内的压力过大，则会使**破裂，导致实验失败。
